آزمیران
دستگاهای آزمایشگاهی
مواد شیمیایی
شیشه آلات
محیط کشتهای میکروبی
فیلتر یا کاغذ صافی
ملزومات
سکوبندی
مقالات و توضیحات
جستجوهای مرتبط
محیط کشت DMEM - F12 جهت 1 لیتر محلول
محیط کشت DMEM-F12 یک محیط کشت سلولی است که در آزمایشگاه‌های بیوشیمی، بیولوژی مولکولی و سلولی استفاده می‌شود. برای تهیه 1 لیتر از این محیط کشت به دو دسته مواد اولیه نیاز دارید، یعنی مواد مربوط به محلول DMEM و مواد مربوط به محلول F12. مواد مورد نیاز به شرح زیر است:
مواد مربوط به محلول DMEM:
- نمک‌های معدنی (۸٫۰۰۰ گرم)
- قند (۱٫۰۰۰ گرم)
- بی‌کربنات سدیم (۳٫۷۵ گرم)
- ل-آلانین (۰٫۲۰ گرم)
- L-آرژنین (۰٫۱۳ گرم)
- L-آسپاراژین (۰٫۱۹ گرم)
- L-سیستئین (۰٫۰۴ گرم)
- L-گلوتامین (۰٫۲۹ گرم)
- L-هیستیدین (۰٫۰۸ گرم)
- L-ایزولوسین (۰٫۰۵ گرم)
- L-لوسین (۰٫۰۹ گرم)
- L-لیزین (۰٫۱۵ گرم)
- L-متیونین (۰٫۰۳ گرم)
- L-فنیل‌آلانین (۰٫۰۸ گرم)
- L-پرولین (۰٫۱۰ گرم)
- L-سرین (۰٫۰۵ گرم)
- L-ترئونین (۰٫۰۶ گرم)
- L-تریپتوفان (۰٫۰۳ گرم)
- L-تیروزین (۰٫۰۸ گرم)
- L-والین (۰٫۰۵ گرم)
- دوپامین (۰٫۰۰۲ گرم)
- اینوزیتول (۰٫۰۰۲ گرم)
- کولین کلراید (۰٫۰۰۲ گرم)
- اسید فولیک (۰٫۰۰۲ گرم)
- پیریدوکسین هیدروکلرید (
شرایط استفاده:
بعد از حل کامل این مواد در آب، محلول DMEM-F12 آماده است. برای نگهداری آن، می‌توانید از شیشه‌های نگهداری با درپوش استفاده کنید. قبل از استفاده، محلول را به دقت مخلوط کنید و از تمامی قطرات هوا و ذرات معلق پاک‌کنید. در صورت لزوم، می‌توانید از فیلتراسیون با فیلترهای سلولوزی یا PES برای پاک‌کردن محلول استفاده کنید. همچنین برای نگهداری، بهتر است محلول را در دمای 2-8 درجه سانتی‌گراد نگهداری کنید و از نور خورشید و حرارت زیاد بپرهیزید.
قبل از استفاده از محلول DMEM-F12، بهتر است مطمئن شوید که محلول شفاف و بدون رسوب است. همچنین، می‌توانید از مواد اولیه آن برای تهیه محیط کشت سلولی و بافتی در آزمایشگاه استفاده کنید. برای این کار، بهتر است با دانستن نوع سلول یا بافت مورد نظر، مقدار و نوع اضافه کردن مواد مغذی، اندازه‌گیری pH و اصلاح آن با بی‌کربنات سدیم، و همچنین اضافه کردن سرم و عامل‌های رشد لازم برای سلول یا بافت مورد نظر، محیط کشت مناسب را تهیه کنید.
لازم به ذکر است که این محلول به تنهایی قابل استفاده نیست و باید با سایر مواد آزمایشگاهی همچون سرم، آنتی‌بیوتیک و... ترکیب شود. همچنین، برای مطالعه‌ی دقیق‌تر درباره‌ی کاربرد و خواص این محلول، بهتر است از منابع معتبر مرتبط با آن استفاده کنید.
روشهای تهیه محلول DMEM-F12
علاوه بر مواردی که در پاسخ قبلی ذکر شد، برای تهیه محلول DMEM-F12 به طور کلی می‌توان به گونه‌های مختلفی از آن استفاده کرد. به عنوان مثال، برای تهیه محیط کشت برای سلول‌های پستاندار، می‌توان از محلول DMEM-F12 حاوی 10% سرم خون گاوی (FBS) و 1% پنی سیلین-استرپتومایسین استفاده کرد. در صورت نیاز به رشد سلول‌های خاص، ممکن است نیاز به اضافه کردن عوامل رشد خاصی داشته باشید.
همچنین، محلول DMEM-F12 به عنوان یک محیط کشت معمولاً با هوازی بودن محیط سلولی تهیه می‌شود. این به این معنی است که محیط کشت باید با فضایی پر از اکسیژن مخلوط شود. برای این کار می‌توان از یک محیط ایجاد کننده‌ی اکسیژن، مانند فشار دادن هوا، استفاده کرد. همچنین، برای حفظ محیط کشت سلولی در دمای مناسب، از یخچال و یا محیط‌های حفظ دمای خاص استفاده می‌شود.
در نهایت، برای استفاده از محلول DMEM-F12 در آزمایشگاه، لازم است که شرایط استفاده و نگهداری آن را به دقت بررسی کرده و از تهیه آن با مواد اصلی و خالص اطمینان حاصل کرده و پس از طی کردن مراحل تهیه و اضافه کردن سایر مواد، در شرایط بهداشتی و دقیق از آن استفاده کنید.
به علاوه، در صورت استفاده از محلول DMEM-F12 برای کشت سلول‌های مختلف، حتماً باید به شرایط خاص سلول‌های مورد نظر توجه کرد. به عنوان مثال، برای کشت سلول‌های سرطانی، ممکن است نیاز به اضافه کردن عوامل رشد خاص و سایر مواد مخصوص سلول‌های سرطانی باشد. همچنین، در برخی موارد می‌توان از محیط‌های کشت مختلفی برای کشت یک نوع سلول استفاده کرد، به عنوان مثال، برای کشت سلول‌های شبه‌لوکمی توسط برخی پژوهشگران از محلول RPMI 1640 استفاده می‌شود.
در نهایت، برای تهیه و استفاده از محلول DMEM-F12 و دیگر محیط‌های کشت، لازم است که از تکنیک‌های بهداشتی و دستورالعمل‌های تهیه و نگهداری آنها به دقت پیروی کرده و در صورت نیاز با پزشک یا کارشناس مربوطه مشورت کنید. همچنین، برای خرید مواد و تجهیزات آزمایشگاهی بهتر است از شرکت‌های معتبر و معرفی شده در بازار استفاده کنید تا از کیفیت و خلوص مواد اطمینان حاصل کنید.
در کل، استفاده از محیط کشت DMEM-F12 برای کشت سلول‌های بافتی و سلول‌های کشت از سرطانی تازه‌ترین روشهای کشت سلولی است که در آزمایشگاه‌های تحقیقاتی و صنعتی استفاده می‌شود. با استفاده از این محیط کشت، سلول‌ها قادر به رشد و انجام فرآیندهای حیاتی خود هستند، که این امر می‌تواند در بررسی عملکرد و خصوصیات سلولی، شناسایی داروهای جدید، بررسی واکنش سلولی به عوامل مختلف، انجام آزمایشهای سمیت و بسیاری از کاربردهای دیگر، مفید باشد.
با این حال، همانند هر ماده شیمیایی دیگر، محیط کشت DMEM-F12 نیز نیاز به رعایت شرایط خاصی دارد تا کیفیت و خلوص آن حفظ شود و بتوان از آن به‌صورت بهینه استفاده کرد. به عنوان مثال، نباید این محیط کشت را در دماهای بالای ۳۷ درجه سانتی‌گراد نگهداری کرد، به عنوانی که باعث تخریب مواد موجود در آن می‌شود. همچنین، باید از نور خورشید و نور مستقیم لامپ‌ها در طول نگهداری این محیط کشت جلوگیری شود.
به همین دلیل، پیشنهاد می‌شود برای نگهداری محیط کشت DMEM-F12، از یخچال با دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و بدون دسترسی به نور استفاده کرد. همچنین، باید از محلول قدیمی شده و یا آلوده به باکتری‌ها و قارچ‌ها، استفاده نشود. در صورتی که محیط کشت به هر دلیلی تغییر رنگ یا شبیه ترک خوردن شده باشد، نباید از آن استفاده کرد.
محصولات مرتبط
:
